血細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T實驗方法 返回列表頁

血細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：血細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T實驗方法
儲存條件： 酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液室溫保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

血細(xì)胞蛋白提取試劑盒適用于從各種哺乳動物全血細(xì)胞中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了。本試劑盒含有的*配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 本試劑盒中不含EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

血細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T實驗方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
血細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補加200μL的1×Binding Buffer。
商陸Phytolacca acinosa α-Spinasterol glucoside ALPHA-波菜甾醇葡糖苷 1745-36-4 C35H58O6 ≥95%

皇芪苷cstrcgclosidqHPLC≥98%，20mg/支

環(huán)黃芪醇 Cycloastragenol 84605-18-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

標(biāo)準(zhǔn)試劑乙酰本胺130440-200202

Petunidin chloride錄化矮牽牛素純度：>98%
22204-53-1 耐普生標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

紅景天速Rhodiolaroot86831-24-120mg

PandaMarilactonine B PANDAMARILACTONINE B 303008-81-3

異戊乙凈 標(biāo)準(zhǔn)品 號：22936-75-0 250mg

丹葉大黃素;Rhapontigenin 500-65-2 20mg 訂購|咨詢
驅(qū)蟲斑鳩菊 Vernonia anthelmintica Willd 0.5g

異綠原醋CCISOchlorogqnicccid3421-88-0HPLC≥98%，20mg/vial

丹皮酚原苷 1-[4-metxoxy-2-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trixy7noxy-6-[[(2R,3R,4S,5S)-3,4,5-trixy7noxyoxan-2-yl]oxymetxyl]oxan-2-yl]oxy-pxenyl]ethanone 72520-92-4 HPLC≥98% 20mg/支

阿魏酸1135-24-6Ferulic acid

芹菜素 Apigenin 520-36-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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