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    BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法

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    品       牌

    廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

    所  在  地上海市

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    更新時間:2017-07-04 14:31:28瀏覽次數(shù):177次

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    公司供應(yīng)的BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法品種類齊全,檢測效果好,質(zhì)量保證,歡迎廣大科研用戶!

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    中藥對照藥材蓽澄茄121532-200501TLC法鑒別

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    產(chǎn)品名稱:BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法
    儲存條件:BCA 試劑室溫保存。蛋白標準-20℃保存。

    有效期:一年。

    產(chǎn)品簡介:

    堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+Cu+BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。BCA法快速靈敏、穩(wěn)定可靠,對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常。

    BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。在組織細胞蛋白提取過程中,常用濃度的去垢劑SDSTriton X-100Tween 不影響檢測結(jié)果

    BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法使用注意事項
    1.微量試劑取用前請 離心集液。
    27-AAD避光保存及使用。
    37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
    4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
    BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法操作方法
    1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
    2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min
    3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
    4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
    A.熒光顯微鏡觀察
    1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
    2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
    1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
    2)用PBS洗滌細胞兩次;
    3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
    4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
    5)避光、室溫反應(yīng)5 min
    3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm7-AAD熒光信號呈紅色。
    B.流式細胞儀分析
    用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm
    7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
    BCA 蛋白定量試劑盒250T實驗方法實驗步驟
    貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
    1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
    2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
    3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
    4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
    5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
    6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
    7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer
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    對照品香蒲新苷111573-200503鑒別

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