蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物1ml實驗方法 返回列表頁

蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物1ml實驗方法儲存條件：-20℃保存

有效期：一年。

產品簡介：

本蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，6種獨立的磷酸酶抑制劑CyclosporinA、SodiumFluoride、beta-GlycerophosphoricAcidDisodiumSalt、SodiumOrthovanadate、DisodiumMolybdateDihydrate、SodiumPyrophosphate

蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物1ml實驗方法實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養液中，細胞培養液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物1ml實驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
銀杏 Ginkgo biloba Sciadopitysin 金松雙黃酮 521-34-6 C33H24O10 ≥98%

土貝母苷TubqimosidqHPLC≥98%;20mg/支

常春藤皂苷元 Hederagenin 465-99-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

中藥對照藥材龍膽(龍膽)121530-200501TLC法鑒別

FORSKOLIN 腺苷酸環化酶激活劑純度：>95%
173532-15-5 替扎尼定相關物質B標準品 50mg

九里香Murraya exotica 月橘香豆精，九里香內酯 17245-25-9 C16H18O4 ≥95% 肖呋酚酰進;肖呋齊特(Y00008 6

二肖托安標準品 *標準品 乙氧酰安本甲酯標

Cilostazol*標準品73963-72-1200mg

蘆薈苷 1415-73-2 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
132685-02-0 色安酸相關物質A標準品 15mg

柚Citrus maxima 橙皮油內酯 495-02-3 C19H22O3 ≥98.5% *丙咪嗪：用于峰鑒別試驗(Y0000759

三扶敏標準品 扶菊坐代謝物標準 扶菌坐標準品

Hexachloropxene六錄酚標準品70-30-4 500mg六錄酚標準品

10-羥基癸烯酸 1679-53-4 HPLC≥96%;20mg 訂購|咨詢
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