膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒50T使用說明書 返回列表頁

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膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒50T使用說明書產品簡介：

哺乳動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發生、發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。傳統制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結構，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒是一種基于化學而非去污劑方法的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從細胞和動物組織提取膜蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。

膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒50T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養液中，細胞培養液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒50T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
丹參 Salvia miltiorrhiza Bge. Salvianolic acid C 丹酚酸C 115841-09-3 C26H20O10 ≥98%

柏秋李醇HundrqdsofcutumnLiChun20mg/支

補骨脂甲素;補骨脂黃同 Bavachin 19879-32-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

檢查用*雜質2100675-200301常溫，避光50mg

Butalbital CIII布他比妥標準品77-26-9200mg
156604-79-4 *安丁三醇標準品(NA) 200mg

小蕓木Micromelum sp. 1,3-二輕基-4-甲氧基-10-甲基吖啶-9(10H)-同 1189362-86-4 C15H13NO4 ≥95% 青陽參甙元170151

Aminoglutethimide安魯米特標準品125-84-8200mg

Aurothioglucose金硫葡糖標準品12192-57-3100mg金硫葡糖標準品

5-O-甲基維斯阿米醇苷 84272-85-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
131926-99-3 蘭素拉唑相關物質A標準品 25mg

魚子蘭Chloranthus elatior none 1372558-34-3 C15H18O3 ≥95% 豬胰島素(I0 20000

4,4-雙甲基-2- (E)-二甲基亞肖安 (z)-二甲基亞肖安

Mepenzolate Bromide溴化甲哌佐酯標準品76-90-4 200mg

白鮮堿 484-29-7 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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