總蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗方法 返回列表頁

總蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗方法產(chǎn)品簡介：

總蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了。本試劑盒含有的*配方能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

總蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗方法實(shí)驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
總蛋白提取試劑盒50T實(shí)驗方法注意事項
（1）本試劑只適用于實(shí)驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實(shí)驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
小麥 Triticum aestivum L. beta-Sitosterol β-谷甾醇 19044-06-5 C29H50O ≥98%

馬錢苷McQicngcn20mg/支

比枯枯靈;畢靈(減)，荷包牡丹減;三烏龜減 Bicuculline 485-49-4 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

中藥對照藥材白蘞121498-200501TLC法鑒別

DIDEOXYFORSKOLIN, 1,9- 福斯高林1,9-二脫氧純度：>95%
152943-33-4 言安他酮雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(避光),(+4℃,+4℃)(危險品) 40mg

銀杏葉Ginkgo biloba Leaf P.E. 果內(nèi)酯 33570-04-6 C15H18O8 ≥98% * - 對照譜圖(Y0000215

CMMP標(biāo)準(zhǔn)品 CNA標(biāo)準(zhǔn)品 CNP標(biāo)準(zhǔn)品

Granisetron xy7nochloride *標(biāo)準(zhǔn)品107007-99-8 150mg

鞣花酸 476-66-4 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
10-脫乙酰巴卡亭 10-DAB (≥98%,HPLC) 32981-86-5 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品

玉蘭Magnolia denudata 望春玉蘭同 A 116424-69-2 C21H24O6 ≥95% 膦鈉六水合物(F0 89000

對照品*100257-200002含量測定

Fumaric Acid 富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品110-17-8 200mg富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品

白樺 Betula alba L. Betulin 白樺脂醇 473-98-3 C30H50O2 ≥98%
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