支原體預(yù)防試劑5ml使用說明書 返回列表頁

支原體預(yù)防試劑5ml使用說明書儲(chǔ)存條件：2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

支原體是一種大小僅為0.2~0.3μm，無細(xì)胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45μm）的原核生物，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。多篇文獻(xiàn)研究表明：當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，狀態(tài)不好。

支原體預(yù)防試劑5ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對(duì)于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
支原體預(yù)防試劑5ml使用說明書注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測(cè)；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
（7）PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth. Rutaecarpine 吳茱萸次堿 84-26-4 C18H13N3O ≥98%

白花前胡炳速WhiticnHuBingsuHPLC≥98%;20mg/支

楊素;5,7-二輕基黃同; 柯應(yīng); 5,7-楊黃素; 金黃同 Chrysin 480-40-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

HPLC法含量測(cè)定*100657-200401常溫，避光100mg

*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品4880-92-6 30mg
1508-65-2 錄化奧昔布寧標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

秋水仙減;秋水仙速Colchicine;ColchicineColchicineHPLC≥98%,20mg/支

p-CouMaryl alcohol 對(duì)輕基肉桂醇 653915

potewwium Gluconate 葡萄糖酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品299-27-4 200mg葡萄糖酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品

派利文堿 2673-40-7 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
*雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 1.15ml

鳶尾皇速Tectorigenin248-77-6HPLC≥98%,20mg/支

StigMasta-4,22-diene-3β,6β-diol 豆甾-4,22-二烯-3BETA,6BETA-二醇 167958-89-6

Oxybenzone 羥本甲酮標(biāo)準(zhǔn)品131-57-7 150mg羥本甲酮標(biāo)準(zhǔn)品

鯊肌醇 488-59-5 HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢
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