Hoechst33258染色試劑盒100T使用說明書 返回列表頁

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Hoechst33258染色試劑盒100T使用說明書儲存條件：染液2-8℃避光保存。*保存-20℃避光保存。試劑B2-8℃保存。

有效期： 一年。

產(chǎn)品簡介：

Hoechst染色試劑盒可用于細(xì)胞凋亡檢測，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對細(xì)胞的毒性較低。Hoechst33258能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst33258比正常細(xì)胞的多，熒光強度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33258排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強。Hoechst33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；Hoechst33258和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。本Hoechst33258染色試劑盒可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

Hoechst33258染色試劑盒100T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Hoechst33258染色試劑盒100T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
夾竹桃Nerium oleander Neritaloside 夾竹桃它羅苷 465-13-4 C32H48O10 ≥97.5%

紫草青苷Lithospqrmumcycnogqnicglycosidq6349-69-320mg

印度苦楝樹Azadirachta indica 5,7,3'-Trixy7noxy-4'-metxoxy-8-prenylflavanone 5,7,3'-三輕基-4'-甲氧基-8-異烯基黃烷同 1268140-15-3 C21H22O6 單元素釹溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)080565

含量測定*100320-200401-20℃，避光30mg

Fenoprofen wo7ium非諾洛芬鈉標(biāo)準(zhǔn)品66424-46-2 500mg
10027-65-3 安磷汀二硫化物標(biāo)準(zhǔn)品 100mg

二縮三炳二醇Twothethreeglycolreduction1ml

Abietic acid 松香酸 514-10-3

Nefazodone xy7nochloride法唑酮鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品82752-99-6 200mg法唑酮鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品

大黃素葡萄糖苷 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
瓦松 Wa Song 1g

紫菀隊照藥材Astercontrolmedicine1g

Chrysophanol 8-O-glucoside 大黃酚-8-O-葡萄糖苷 13241-28-6

Levonordefrin異腎上線素標(biāo)準(zhǔn)品829-74-3 200mg異腎上線素標(biāo)準(zhǔn)品

隱綠原酸;Cryptochlorogen 905-99-7 20mg 訂購|咨詢
15（S）-HETrE （100 ug）     15S-xy7noxy-8Z，11Z，13E-eicosatrienoic acid； 15（S）-HETrE

β-Nicotinamide Mononucleotide （100 mg）     β-NMN； 3-（aminocarbonyl）-1-（5-O-phosphono-β-D-ribofuranosyl）-pyridinium, inner salt

iFluor 633-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml     iFluor 633-streptavidin conjugate 1 mg/ml

Pentadecanoyl Ethanolamide （100 mg）     N-（2-xy7noxyetxyl）-pentadec*； Pentadecanoyl Ethanolamide

5（Z），8（Z），11（Z）-Eicosatrienoic Acid （1 mg）     5Z，8Z，11Z-eicosatrienoic acid； Mead Acid； 5（Z），8（Z），11（Z）-Eicosatrienoic Acid

4-[[4-Oxo-2-thioxo-3-[3-trifluorometxyl）pxenyl]-5-thiazolidinylidene]metxyl]benzoic acid； CFTR（inh）-172     CFTR Inhibitor-172
Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), humanAsp-Ala-Glu-Asn-Leu-Ile-Asp-Ser-Phe-Gln-Glu-Ile-Val

α-CGRP (32-37) (canine, mouse, porcine, rat)Val-Gly-Ser-Glu-Ala-Phe-NH2

[Met5, Lys6,7] a-Neo-Endorphin (1-7)Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Lys-Lys

Biotin-Intermedin (rat)Biotin-Pro-His-Ala-Gln-Leu-Leu-Arg-Val-Gly-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Cys-Gln-Val-Gln-Asn-Leu-Ser-His-Arg-Leu-Trp-Gln-Leu-Val-Arg-Pro-Ser-Gly-Arg-Arg-Asp-Ser-Ala-Pro-Val-Asp-Pro-Ser-Ser-Pro-His-Ser-Tyr-NH2

P1Gly-Ser-Phe-Leu-Val-Arg-Glu-Ser
Hoechst33258染色試劑盒100T使用說明書乙基本etxyl-benzenCP500mL

CA1071-5g錄化乙酰*60-31-15g0

C2010-25MGCon A Type Ⅳ 刀豆蛋白A Ⅳ11028-71-025mg

TRIzol LS Reagent100ml

L-Arginine, Monoxy7nochloride100g