細(xì)胞培養(yǎng)常見的問題

如何用臺盼蘭計數(shù)活細(xì)胞？ 
細(xì)胞培養(yǎng)用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0.1毫升的細(xì)胞中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞。活細(xì)胞排斥臺盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞。
如何消除組織培養(yǎng)的污染？
重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。
下面是*的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟:
1 在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，**下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3 每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2－3代。
5 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6 重復(fù)步驟4。
7 細(xì)胞培養(yǎng)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否以已被消除。
8.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？ 
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。 
125mg    Desoxycorticosterone Pivalate    808-48-0    去氧皮質(zhì)酮新戊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Desipramine Hydrochloride    58-28-6    鹽酸去甲咪嗪標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Dapsone    80-08-0    4,4'-二氨基二苯砜標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Dacarbazine    4342/3/4    *標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Clorazepate Dipotassium CIV    57109-90-7    氯革酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Ciprofloxacin Formamide    93594-39-9    *甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Ciclopirox Olamine    41621-49-2    環(huán)砒酮胺標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Chlorpheniramine Maleate    113-92-8    *標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Chloroxylenol    1988/4/6    氯二甲酚標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Cellulose Acetate    9004-35-7    醋酸纖維素標(biāo)準(zhǔn)品
125mg    Cellacefate    9004-38-0    纖維醋法酯標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞培養(yǎng)