細胞培養的浸潤轉移能力實驗結果

1 免疫組織化學結果

CD68定位于細胞培養細胞質, 陽性染色為棕黃或棕褐色顆粒, 不著色為陰性。E-cadherin 定位于細胞膜, 陽性染色為棕褐色顆粒; Vimentin定位于細胞質, 陽性染色為棕褐色顆粒。在癌巢及癌間質均有大量CD68陽性的細胞浸潤, 陽性表達率為80%, 在正常組織中其陽性表達率為25%, 差異有統計學意義(P<0.05)。CD68表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移相關(P<0.05); 而與患者年齡、腫瘤大小及ER、PR、c-erbB-2等臨床病理特征無顯著性相關(P>0.05); 與E-cadherin表達呈負相關(P<0.05), 與 Vimentin表達呈正相關。

2 TAMs的分離鑒定

CD68表達于巨噬細胞細胞質, 陽性物質在細胞質內染色后發綠色熒光, PBS為一抗時, 胞漿呈陰性。目前, 通過對TAMs的鑒定, 明確 CD68是巨噬細胞特異性分子標志物, 所以CD68陽性的細胞即為癌組織中分離得到的TAMs。

 3 細胞形態學觀察倒置顯微鏡觀察兩組MCF-7細胞的形態, 發現對照組細胞較鈍圓, 排列緊密, 融合度高; TAMs條件培養基培養的細胞, 細胞偽足不同程度地增多, 細胞變得細長呈梭形, 細胞間融合度降低。

4 TAMs條件培養基能夠促進MCF-7細胞的體外侵襲轉移能力

結果顯示, 加入TAMs條件培養基的實驗組中遷移細胞培養數比對照組顯著增加; 對照組穿透基質膜細胞數為(76±6)個, 實驗組為(115±5)個, 差異有統計學意義。TAMs條件培養基能夠增強MCF-7細胞的體外侵襲轉移能力。

5 Western blot檢測MCF-7細胞培養中E-cadherin 及Vimentin蛋白的表達

檢測結果顯示, 實驗組MCF-7細胞經過TAMs條件培養基的培養后, E-cadherin表達量比對照組明顯減少, 而Vimentin表達量明顯增多。
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC  熒光素標記CD244抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC  熒光素標記CD244抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA  白介素2受體a鏈抗體     0.1ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA /PE-Cy5  熒光素PE-Cy5標記兔抗人、大、小鼠白介素2受體a鏈抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA /PE-Cy5  熒光素PE-Cy5標記兔抗人、大、小鼠白介素2受體a鏈抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA/FITC  熒光素標記CD25/白介素2-受體抗體IgG     0.2ml細胞培養