細胞凋亡檢測培養(yǎng)的條件

細胞凋亡檢測在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細胞基本相同。

1、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞凋亡檢測代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能;當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

3、氣體環(huán)境

氣體是人體細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

二氧化碳既是細胞代謝產(chǎn)物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。有資料顯示，原代羊水細胞培養(yǎng)PH6.8時適。

細胞培養(yǎng)液PH濃度的調(diào)節(jié)常用的為加NaHCO3的方法，因為NaHCO3可供CO2，但二氧化碳易于逸出，故適用于封閉培養(yǎng)，而羥乙基乙硫磺酸(HEPES)因其對細胞無毒性，也起緩沖作用，有防止PH迅速變化的特性而用于開放細胞培養(yǎng)技術(shù)中，其大優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

4、細胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)是既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基的種類很多，按其物質(zhì)狀態(tài)分為半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類;按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。

(1)合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基是根據(jù)細胞所需物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴格配制而成的。內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機鹽、維生素、微量無素和細胞生長因子等。單獨使用細胞雖有生存但不能很好的生長增殖。

(2)天然培養(yǎng)基：使用普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促粘附因子及其多種活性物質(zhì)。與合成培養(yǎng)基合用，能使細胞凋亡檢測順利增殖生長。常見使用為5-20%。