蛋白酶抑制劑分子生物學(xué)方法

蛋白酶抑制劑這是一類利用細(xì)胞因子的基因探針檢測特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù)。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的方法多種多樣，常使用斑點雜交、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR，細(xì)胞或組織原位雜交等。實驗的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測物(提取的mRNA樣品或細(xì)胞/組織標(biāo)本)。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物(如*等)標(biāo)記并與目的基因互補的DNA或單鏈DNA、RNA。根據(jù)其來源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點雜交及Northern blot，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cDNA探針為例主要包括：
①質(zhì)粒DNA的提取；
②靶DNA的分離；
③靶DNA標(biāo)記；
④待測樣品mrna的提取；
⑤標(biāo)記cDNA探針對待檢樣品的雜交；
⑥放射自顯影或顯色分析。近年來出現(xiàn)的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點，甚至從1～10個細(xì)胞中就可檢出其中的特異mRNA。
研究人員注意到，這些細(xì)胞器的內(nèi)含物決定著它們的特定功能，但是細(xì)菌微區(qū)室的蛋白外殼整體結(jié)構(gòu)基本上都是一樣的。這種微區(qū)室蛋白外殼提供一種選擇性通透屏障，從而將在它的內(nèi)部發(fā)生的反應(yīng)與細(xì)胞的其余部分分隔開。蛋白酶抑制劑這能夠讓多步驟反應(yīng)更加地發(fā)生，阻止不想要的干擾，并且對這些密封的反應(yīng)可能產(chǎn)生的有毒化合物進(jìn)行限制。

 囊性組織液體蛋白15IgG 人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)

 腦腸肽（一種新的生長激素釋放肽）IgG 人凋亡抑制因子(IAP)

 腦啡肽IgG 人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)

 腦啡肽酶IgG 人凋亡信號調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)

 腦瘤相關(guān)基因IgG 人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)

 腦鈉素IgG 人凋亡相關(guān)半*肽酶4(Casp4)

 腦鈉素IgG 人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1) 
蛋白酶抑制劑