蛋白酶抑制劑特定分選收集

蛋白酶抑制劑能夠快速測定細胞懸液中單個細胞的生物學性質，并可以對特定的細胞進行分選收集。廣泛用于細胞生物學，免疫學，遺傳學，基礎醫學等領域。接下來的Protocol 中以小鼠的淋巴細胞為例進行細胞表面和胞內染色。

 試劑準備

Wash Buffer：PBS+1% FBS

破膜劑（ICS）：用雙蒸水配置 10 % Saponin（Sigma）。

破膜固定劑：將配好的 ICS 用 4% 多聚甲醛稀釋 100 倍

ICS Wash Buffer：將配好的 ICS 用 Wash Buffer 稀釋 100 倍。

 細胞表面染色

收集各組細胞，進行細胞計數，加入適量 Wash Buffer 液洗滌，1500 rpm 離心 5 min，去上清，加入 50 μl Wash Buffer 重懸。

（可選）Live dead 染色，每管加 0.1 μL Zombie GreenTM Dye（樣品多時使用時可先稀釋），震蕩混勻，室溫避光孵育 10～15 min。Wash Buffer 液洗滌，1 500 rpm 離心 5 min，棄上清。

封閉 Fc 受體：每管中加入 1 μg/106 細胞 Anti-Mouse CD16/CD32 抗體封閉熒光抗體 Fc 受體引起的非特異性染色。震蕩混勻，4℃ 孵育 30 min（或室溫避光 15 min）。Wash Buffer 液洗滌，1 500 rpm，離心 5 min，棄上清。

用適量體積 Wash Buffer 液重懸每個樣本，將各組細胞等細胞數混合后分裝到單染管和不染抗體管，作為流式檢測時調節電壓。

單染管中加入相應表面染色抗體，同時在每個樣本中加入 1 μL percp CD3/106 細胞和 0.5 μL PE CD4/106 細胞，震蕩混勻，4℃ 避光孵育 30 min（或室溫避光 15 min）。

蛋白酶抑制劑用 Wash Buffer 液洗滌，1500 rpm 離心 5 min，棄上清。

打孔或者加入 200 μL 1% PFA（多聚甲醛）固定過夜。
103597-45-1    Bisoctrizole    紫外光吸收劑UV-360標準品    200mg
104344-23-2    Bisoprolol Fumarate    *標準品    200mg
61-75-6    Bretylium Tosylate    托西溴芐銨標準品    200mg
138890-62-7    Brinzolamide    布林佐胺標準品    200mg
51333-22-3    Budesonide    布*標準品    200mg
33396-08-2    Buspirone Hydrochloride    鹽酸*標準品    200mg
125-40-6    Butabarbital CIII    *標準品    200mg
77-26-9    Butalbital CIII    布他比妥標準品    200mg
94-25-7    Butamben    氨苯丁酯標準品    200mg
94-26-8    Butylparaben    羥苯丁酯標準品    200mg
5743-28-2    Calcium Ascorbate    抗壞血酸鈣標準品    200mg
蛋白酶抑制劑