細(xì)胞培養(yǎng)樣品之裂解液用量

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
細(xì)胞培養(yǎng)裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
農(nóng)殘級(jí)N-甲基吡咯烷酮，1-甲基...    4L    甜味素(阿斯巴甜,天門冬酰苯丙氨...    CDGG-012027-04-5PAK    120mg/L于乙腈：水 1：1,5 x 2 ml
HPLC級(jí)N-甲基吡咯烷酮，1-...    4L    甜味素(阿斯巴甜,天門冬酰苯丙氨...    CDGG-012027-03-5PAK    234mg/L于乙腈：水 1：1,5 x 2 ml
HPLC級(jí)N-甲基吡咯烷酮，1-...    1L    甜味素(阿斯巴甜,天門冬酰苯丙氨...    CDGG-012027-03    234mg/L于乙腈：水 1：1,2 ml
HPLC級(jí)N-甲基吡咯烷酮，1-...    500ml    甜味素(阿斯巴甜,天門冬酰苯丙氨...    CDGG-012027-02-5PAK    390mg/L于乙腈：水 1：1,5 x 2 ml
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