細胞培養(yǎng)常見問題和日常維護

細胞培養(yǎng)不論使用什么類型的蛋白柱，首先必須對其填料的性能有基本了解。如該柱適用什么樣的溶劑，什么類型的樣品，流速及耐壓范圍等，GAT提供的各種類型的蛋白柱，在柱箱內均有詳細的說明書，使用柱子前，務必要仔細閱讀，以保證正確使用這些柱子。下面就蛋白分離中常出現(xiàn)的問題進行討論。

1.樣品不保留：

在用離子交換柱分離蛋白時，流動相的pH值對保留值影響很大，當選用陰離子型蛋白分析柱時，如#####若流動相的pH值小于蛋白的pI值時，蛋白分子陽離子狀態(tài)，則在柱上沒有保留，只有當流動相的pH值大于蛋白的pI值時，蛋白分子呈陰離子，才能在陰離子交換柱上得到保留。另外，當流動相或樣品中的離子強度過大時，也會造成蛋白在離子交換柱上不保留。
此外，上樣量過大，亦會使蛋白樣品保留變弱，一般樣品的上樣量不應超過該填料結合蛋白量的20%，在選用GPC柱時，應特別注意填料的孔徑及相應的可分離蛋白的分子量范圍，若蛋白的分子量超過填料的孔徑極限則蛋白樣品也不保留。
在用反相色譜分離蛋白時，流動相中有機溶劑的比例會影響蛋白的保留值。有機溶劑比例過高，會使蛋白的樣品與填料的作用變弱而過早地洗脫。流動相中的TFA可作為離子對試劑和pH調節(jié)劑，有利于蛋白的保留。

2.柱壓過高

柱壓過高的原因在于柱入口的堵塞及填料間的縫隙的減小或堵死，這些原因有：非硅膠填料的顆粒膨脹（主要是由于使用過高比例有機溶劑引起）；來自樣品，流動相的顆粒堵塞、細菌生長，流速過高等，為防止柱壓過高，應使用符合要求的流動相組成。樣品，流動相使用前嚴格過濾。為了保存時防止細菌生長。以硅膠為基質的柱子可使用20%有機水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的疊氨鈉。

3.性能改變

蛋白柱在使用一段時間后，其性能會有所改變（保留值變化，柱效下降等）。原因之一是被分離樣品中細胞碎片，類脂，酸等的污染，對聚合物基質的柱子可用0。1-1。0N NaOH溶液清洗，注意以硅膠為基質的柱子（如Protein Pak凝膠柱）不能用NaOH清洗。

4.回收率（質量回收率）低

蛋白質量回收率低往往發(fā)生在使用凝膠過濾柱時，細胞培養(yǎng)特別是以硅膠為基質的凝膠蛋白分析柱時，盡管硅醇基已經(jīng)過雙醇封口，但殘留的硅醇基仍會與蛋白的堿性基團發(fā)生非GFC效應，造成回收率低，分離度差等現(xiàn)象,解決這一現(xiàn)象的方法是在流動相（通常是水）中加入0。M-0。3M鹽作為改性劑以減少這種非GFC效應。
20mg    7689-03-4    *    Camptothecin
20mg    2034-69-7    西*    Daphnoretin
20mg    55750-84-0    西紅花苷II    Crocin II
20mg    42553-65-1    西紅花苷    Crocin
20mg    107912-97-0    西伯利亞遠志糖A5    Sibiricose A5
20mg    61825-98-7    西貝堿    Sipeimine
20mg    18296-44-1    戊曲酯，纈草三酯    Valepotriate
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