原代貼壁細胞吉姆薩染色法

細胞凋亡檢測染液制備：
      1. 稱取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油；
      2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內充分混合，研磨至無顆粒；
      3. 將剩余的甘油倒入研缽，于56℃保溫2h；
      4. 加入33ml純甲醇混勻，即為吉姆薩母液，將其保存于棕色試劑瓶內；
      5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液。
 
      貼壁細胞染色步驟：
      1. 去除培養器皿內的培養液，用*反復漂洗單層培養物2次；
      2. 加入*，再逐滴加入等體積甲醇，邊加邊混合，靜置10min；
      3. 將50%甲醇-BSS混合液丟棄，加入新鮮的甲醇液浸泡固定細胞10min，然后用甲醇漂洗細胞1次；
      4. 將瓶內細胞干燥后儲存或直接染色；
      5. 按2ml/cm2 的比例滴加吉姆薩染液，覆蓋細胞層，染色2min；
      6. 移除染液，用自來水沖洗掉粉紅色背景后，再用去離子水沖洗細胞；
      7. 用顯微鏡觀察單層潮濕細胞。若細胞已干，可重新使細胞潮濕后再觀察。
 
      結果：
      細胞凋亡檢測核被染成紫紅色或紫藍色，而細胞質則被染成淺紅色。
 
      吉姆薩染色法注意事項：
      1. 染液宜現用現配，舊染液染色效果不佳。染液保存時間不宜超過48h；
      2. 吉姆薩對pH極敏感，因此，緩沖液pH要準確，否則染色效果不佳。如用染色缸染色時，隨染色時間的延長，在染液表面常形成一層氧化膜（發亮）易附著在玻片上形成污穢，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是現配者時，染色前應先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進行染色。染色完畢，應把標本浸入水中漂洗染液。
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