小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞；PUMC-mips-B1運輸保存 返回列表頁

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞；PUMC-mips-B1運輸保存操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量*，使*的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

細胞名稱   小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞；PUMC-mips-B1運輸保存
形態(tài)特性 克隆樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 裸鼠移植實驗證明可向三個胚層分化。

培養(yǎng)條件 KO-DMEM + 15% FBS + 103U/ml LIF + 2mM L-Glu + 1% NEAA + 0.1M β-Mer

傳代方法 1:10傳代；3~4天傳代一次

傳代情況

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）

STR -

同工酶

染色體

使用權(quán)限 A類

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞；PUMC-mips-B1運輸保存細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全， 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生*的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
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