海洋微生物菌種檢測原理

海洋微生物菌種檢測原理
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被人血管生成素樣蛋白3（ANGPTL3）多克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中人血管生成素樣蛋白3（ANGPTL3）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中人血管生成素樣蛋白3（ANGPTL3）含量。
操作步驟
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加*40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復4的操作。
8、洗板：重復5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
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