分析方法在其生命周期中會需要變更或調整以滿足性能指標的要求，當在不同的實驗室轉移（確認的）方法時，如從研發實驗室到QC實驗室，或類似CRO、CMO/CDMO實驗室，或者各種生物技術創新平臺，需要考慮(U)HPLC儀器參數對色譜分離的影響，尤其面臨儀器參數偏差，以及某些方法對偏差做出的響應時，確保液相方法在各原實驗室和方法接收方的成功轉移。針對補償梯度延遲體積的差異，基于軟件的GDV差異補償，通常是通過進樣事件的時間位移或梯度曲線變化的方法改變，這可能會引起監管機構的擔憂。管制機構通常允許改變等度保持時間，只為模擬體積差異。基于硬件的解決方案是使用硬件來模擬GDV和混合行為， 而混合器和樣品環的手動改變可能需要系統再確認。最為可選是LC系統具備連續可調GDV，有利于追蹤，不需要再確認。

方法轉移并不像看上去那么簡單，需要考慮至關重要的儀器細節，主要因素有梯度延遲體積GDV、擴散效應、溫控模式，以及不那么明顯的檢測器設置。

從下圖可見儀器參數及其對成功的 (U)HPLC方法轉移的重要性，離圖形中心越遠，參數越重要。重要性值是估計值，取決于分離溫度，流速等方法的詳細信息。

梯度延遲體積(GDV)影響梯度方法的保留時間和分離度，需要注意混合體積收縮效應和泵的混合模式不同引起的流速和梯度非線性，不同配置儀器上梯度延遲體積GDV也非恒定不變，對流速和壓力的依賴性各不相同。

流動相混合體積效應：收縮體積依賴于溶劑和混合比例，LPG泵頭對GDV有貢獻

不同類型HPLC儀器上梯度延遲體積GDV 對流速和壓力的依賴性見下圖。

HPG和HPG之間的方法轉移匹配 GDV 非常簡單，LPG 與 LPG之間的方法轉移更有挑戰性（混合特性也必須匹配），最好避免LPG和HPG之間的轉移。

更換混合器是物理改變系統GDV的有效方法。缺點是它只允許根據可用的混合器體積逐步改變GDV，是一種粗調GDV方式。

Vanquish 液相色譜系統自動進樣器計量泵的可設定閑置體積允許精細調節系統GDV：

1

改變泵梯度混合器，以實現 GDV逐步變化

2

滿足高要求難分離時無縫調節的需要

3

不需要手動改變硬件設置

4

審計追蹤和設備驗證wan全合規

Vanquish液相色譜系統在自動進樣器中使用計量泵在進樣前吸取樣品。計量泵是流路的一部分，對系統的GDV有貢獻。計量泵的沖洗體積可以通過柱塞的運動而改變， 這一沖洗的體積就是閑置體積，閑置體積的改變有助于GDV的無縫調節。計量泵柱塞位置對梯度延遲體積的影響。結構設計旨在確保獨立于活塞位置，整個閑置腔體被沖洗，結構設計可防止在所有柱塞位置（閑置體積）和流速中出現停滯區。可以通過軟件命令減少到較小體積來模擬具有較小 GDV 的系統（圖 1，左圖）或增加到更大的體積以模擬具有較高 GDV 的系統。設定的閑置體積和進樣體積是相互獨立的，即兩者的任意組合是可能的。閑置體積的設置由賽默飛世爾科技變色龍色譜數據系統 （CDS） 軟件審核追蹤 ，因此wan全可審核。

為了進一步擴展 GDV 的靈活性，一個方法轉移套件 （P/N 6036.2100） 可用于 Vanquish HPLC 系統。它由一個 2 位 6 通切換閥和一個可接入流路的 200 μL 定量管組成，是可切換的附加梯度延遲體積。

在上圖旁路位置，來自泵的連接管線直接與進樣器聯通，類似于儀器沒有安裝方法轉移套件。當切換閥時，定量管變成流路的一部分，管線的體積添加到系統的整體梯度延遲體積中（上圖下）。

摩擦熱下的UHPLC 強制空氣循環與靜止空氣柱溫控模式比較如下：

避免由預熱和柱溫控模式引起的熱不匹配造成的分離度的損失。

柱外體積ECV包括柱前和柱后體積，后者主要來自流通池體積，其影響大小取決于色譜柱的尺寸，Viper零死體積接頭有助于減小ECV。

樣品溶劑不匹配會造成峰變形和分離度損失：

當樣品溶劑（100%甲醇）強度高于洗脫液（50：50水/乙腈）時需要減少進樣體積。使用UDP用戶自定義進樣程序功能可實現緩解溶劑效應，大體積進樣、在線衍生等功能，幫助用戶對設備實施精準操控，更能令方法轉移后的譜圖質量超越原譜圖質量。

使用1 mm 內徑色譜柱等度分離標準品化合物，使用高靈敏度的60 mm 流通池 (藍色標記) 和低擴散流通池 (紅色標記)，可見使用大體積流通池時分析物峰擴展和分離度損失。當色譜柱尺寸保持不變時，適用流通池體積選擇為10%峰體積這一原則。