注射劑是指藥物制成的供注入體內(nèi)的無菌溶液（包括乳濁液和混懸液）以及供臨用前配成溶液或混懸液的無菌粉末或濃溶液。由于其給藥途徑的特殊性，其用藥安全風(fēng)險(xiǎn)要高于其他普通口服制劑。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在中國注射劑的使用率遠(yuǎn)高于其他發(fā)達(dá)國家，高達(dá) 65%，臨床風(fēng)險(xiǎn)較高。

2013年2月，國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）發(fā)布《關(guān)于開展仿制藥質(zhì)量一致性評價(jià)工作的通知》

2016年5，CFDA關(guān)于仿制藥一致性評價(jià)的意見（2016年第106號）公示了2018年底前須完成仿制藥一致性評價(jià)的289 個(gè)品種。

2017 年 12 月，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心（CDE）發(fā)布了《關(guān)于開展仿制藥質(zhì)量一致性評價(jià)工作的通知》和《已上市化學(xué)仿制藥（注射劑）一致性評價(jià)技術(shù)要求（征求意見稿）》

我國正全力推進(jìn)注射劑一致性評價(jià)工作，標(biāo)示著注射劑開始走上一致性評價(jià)和提升藥學(xué)研究的道路。2019年，將會有更多的品種要求仿制藥一致性評價(jià)過程，更多的藥企將面臨巨大的工作量以保證藥品符合國家要求。

頭孢吡肟，作為一種新型第四代頭孢菌素，對諸多革蘭陽性和革蘭陰性細(xì)菌有較強(qiáng)的抗菌活性。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于治療敏感細(xì)菌所致的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、皮膚和軟組織、骨與關(guān)節(jié)、婦產(chǎn)科感染。

圖1 頭孢吡肟的分子式

在此，本文推薦一種新型電霧式檢測器（CAD），從輔料精氨酸的含量、主成分及其成鹽離子比例，以及雜質(zhì)譜對比分析，對注射用頭孢吡污進(jìn)行了分析，初步評價(jià)了仿制藥物與原研藥物的一致性。

什么是電霧式檢測器（CAD）？

電霧式檢測器（CAD）是一款新型通用型檢測器，它靈敏度高，重現(xiàn)性好，能為難揮發(fā)化合物提供一致性響應(yīng)！因此能夠更為準(zhǔn)確的用于定量分析或半定量分析，定量大部分非揮發(fā)性和半揮發(fā)性的有機(jī)物，成為了藥物分析的寵兒。2015年和2018年的美國藥典論壇（USP PF）以及2016年的歐洲藥典（EP），均發(fā)布了用電霧式檢測器（CAD）測定的方法。

圖2  電霧式檢測器（CAD）

UV檢測器結(jié)果

藥物一致性評價(jià)，主要對藥物雜質(zhì)組成和含量進(jìn)行分析，它既是保證藥物安全性的重要方面，同時(shí)其雜質(zhì)譜也是也反映原料藥物工藝手段之一。本文的工作是選取仿制藥物和參比制劑進(jìn)行雜質(zhì)譜的比較，參考《USP40 Cefepime Injection》方法進(jìn)行對比分析，結(jié)果在 UV254nm 下串聯(lián)CAD檢測器，從上述的兩個(gè)方面比較仿制藥與參比制劑的差異性。UV254nm測試結(jié)果見圖 3。

圖3  參比制劑 (A)；仿制廠家1#的兩種規(guī)格(B)、(C)；仿制廠家 2# (D)，在 UV254nm 疊加譜圖

如圖3，在 UV254nm 下，仿制藥廠家 1# 與參比制劑的雜質(zhì)譜基本一致，且面積歸一化含量相近； 仿制藥廠家 2# 與參比制劑相比，雜質(zhì)譜組成相近，但部分雜質(zhì)含量差異較大，其中RT=20.807，21.960，29.727 和 30.570min 的雜質(zhì)峰含量極低或沒有，而 RT=19.910，28.267min 的雜質(zhì)峰相對含量較高。這些差異特征峰還需進(jìn)一步通過質(zhì)譜進(jìn)行定性指認(rèn)。

CAD檢測器結(jié)果

為保證樣品檢測上的完整性，實(shí)驗(yàn)也通過串聯(lián) CAD 檢測器，比較仿制藥與參比制劑的差異性，結(jié)果由圖 4所示，RT=21.964,29.752 和 30.570min 的色譜峰為參比制劑與仿制廠家 1# 的共有雜質(zhì)峰，而仿制廠家 2# 未檢測到。且RT=7.671min 雜質(zhì)峰含量差異也比較顯著。表明仿藥物與原研制劑存在工藝上的差異。

圖4  參比制劑 (A)；仿制廠家1#的兩種規(guī)格(B)、(C)；仿制廠家 2# (D)，在 CAD的疊加譜圖

輔料精氨酸的測定

注射用鹽酸頭孢吡肟采用原料藥物加適量精氨酸制成。對主成分和輔料含量測定，可保證藥物有效性，在《要求》中也明確規(guī)定仿制藥輔料用量為參比制劑相應(yīng)輔料用量的95%-105%。USP40 版未對精氨酸做定量分析，僅有鑒別項(xiàng)；CP2015 版采用離子對色譜法對其進(jìn)行定量（實(shí)際操作較為不便）。另外針對藥物成鹽率的測定也是保證藥物質(zhì)量的重要內(nèi)容，而標(biāo)準(zhǔn)方法也不含有相關(guān)檢查項(xiàng)。

本文采用混合基質(zhì)柱 Trinity-P1，該色譜柱具有陰、陽離子交換和疏水保留等機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對影響分離的幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)：有機(jī)相比例、乙酸銨濃度和方法梯度進(jìn)行了優(yōu)化。

結(jié)果由圖5、6 所示，輔料精氨酸、藥物主成分及其成鹽離子分離良好。精氨酸在 10.0-1000.0 µg/mL 范圍內(nèi)， 線性擬合曲線的相關(guān)系數(shù) R²大于 0.999，表明其線性相關(guān)關(guān)系較好，其中10 µg/mL的信噪比為20。圖7從輔料、API及其成鹽離子的比例上對比了仿制藥和原研制劑的一致性。

圖5  不同濃度精氨酸標(biāo)準(zhǔn)品疊加譜圖（A）及其響應(yīng)曲線（B,PF=1.4）

圖6  仿制廠家 1# 的 0.5g（A）和 1.0g（B）規(guī)格、仿制廠家 2#（C）參比制劑 (D) 在 CAD 上的疊加譜

圖7  仿制藥與參比制劑精氨酸、主成分和氯離子比例對比

結(jié)論

本文采用 HPLC-CAD 方法初步對注射用頭孢吡肟制劑從雜質(zhì)譜、輔料含量及其主成分、成鹽離子比例等方面對比了仿制藥物與參比制劑的一致性。結(jié)果采用賽默飛*的Trinity P1 混合基質(zhì)柱結(jié)合 CAD 檢測器，可同時(shí)完成主成分、成鹽離子和輔料的分析，另外實(shí)驗(yàn)也對比了仿制藥和參比制劑的雜質(zhì)譜，實(shí)驗(yàn)后續(xù)工作會對差異性較大雜質(zhì)進(jìn)行 LC-MS 的定性分析。

賽默飛以創(chuàng)新發(fā)展、合規(guī)保駕護(hù)航為基本，為仿制藥一致性評價(jià)中耗時(shí)的藥學(xué)等效性評價(jià)(PE)提供快速有效的解決方案，并為生物等效性評價(jià)(BE)提供靈活性、穩(wěn)定性及合規(guī)性的智能解決方案，從樣品前處理、色譜分離檢測、質(zhì)譜監(jiān)測、數(shù)據(jù)管理出發(fā)，協(xié)助制藥企業(yè)及技術(shù)外包部門以短的時(shí)間內(nèi)完成合規(guī)有效的一致性評價(jià)過程，以全力推進(jìn)我國的注射劑一致性評價(jià)工作。

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