賽默飛色譜柱的原理是根據進入色譜柱的化合物的極性，沸點等一系列的化學性質，固定相對于它們有著不同的吸附和解吸附的能力，導致化合物在色譜柱上被分離。賽默飛色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照賽默飛色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，賽默飛色譜柱測得的結果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

　　賽默飛色譜柱實驗前樣品的前處理

　　1、使用流動相溶解樣品。

　　2、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。

　　3、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。

　　流動相的配制

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此賽默飛色譜柱要求流動相具備以下的特點：

　　1、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在賽默飛色譜柱中)。

　　2、流動相與樣品不產生化學反應。

　　3、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低賽默飛色譜柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

　　4、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。賽默飛色譜柱除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。

　　5、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　6、流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致賽默飛色譜柱實驗無法進行。