Stbl3 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*5-生命科學(xué)儀器 返回列表頁(yè)

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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

 IFA 人抗內(nèi)因子抗體 規(guī)格： 48T/96T

 AECA 人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T

 AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格： 48T/96T

 AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格： 48T/96T

 AOAb 人抗卵巢抗體 規(guī)格： 48T/96T

 EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM  規(guī)格： 48T/96T

 EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM  規(guī)格： 48T/96T

 EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgG  規(guī)格： 48T/96T

 APSA 人抗磷脂酰*抗體 規(guī)格： 48T/96T

 APSA 人抗磷脂酰*抗體 規(guī)格： 48T/96T

 Apl/APA 人抗磷脂抗體 規(guī)格： 48T/96T

 TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格： 48T/96T

 TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格： 48T/96T

 ALG 人抗淋巴細(xì)胞球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 ALA 人抗淋巴細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T

 ASO 人抗鏈球菌溶血素O/抗O 規(guī)格： 48T/96T

 ADH/VP/AVP 人抗利尿激素/*加壓素 規(guī)格： 48T/96T

 SCA 人抗類固醇細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T

 RANA 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗

2-溴-6-氟苯甲酸 2252-37-1

3-三氟甲氧基溴苯 2252-44-0

2-氯-5-甲氧基嘧啶 22536-65-8

異硫氰酸異丙酯 2253-73-8

三乙基硼氫化鋰 22560-16-3

1,3-二氟-5-碘苯 2265-91-0

仲丁醇鋁 2269-22-9

Stbl3 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*55-甲基* 22717-57-3

二氫雙(2-甲氧乙氧基)鋁酸鈉 22722-98-1

2,3-二氫-1-苯并呋喃-5-基硼酸 227305-69-3

磷酸三鉀(三水合物) 22763-03-7

D(-)-對(duì)羥基苯* 22818-40-2

* 22832-87-7

Boc-D-* 22838-58-0

2-溴-5-甲氧基苯甲酸 22921-68-2

二氫-3(2H)-呋喃酮 22929-52-8

2,4-噻唑烷二酮 2295-31-0

2-氯-5-硝基-4-甲基吡啶 23056-33-9

2-氯-4-硝基吡啶 23056-36-2

3-氯苯肼鹽酸鹽 2312-23-4

6-三氟甲基* 231291-22-8

(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇 23190-16-1

L-脯氨醇 23356-96-9

(R)-(-)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺 23357-46-2

對(duì)三氟甲基酸甲酯 2338-75-2

原抗體 規(guī)格： 48T/96T

 RANA 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體 規(guī)格： 48T/96T

注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。