BW25113 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10-分子生物學(xué)儀器 返回列表頁(yè)

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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

shēng huà shì jì 十六烷基*基* 容量： 100克

shēng huà shì jì 十六烷基*基氯化銨 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 十六烷基二甲基乙基* 容量： 100克

shēng huà shì jì 十六烷基二甲基芐基氯化銨 容量： 2～8℃ 100毫克

shēng huà shì jì 十六烷基吡啶鹽酸鹽 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 十六烷 容量： 2～8℃ 500毫克

shēng huà shì jì 十六醇 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 十九烷 容量： 5克

shēng huà shì jì 十二烯基丁二酸酐 容量： 10毫升

shēng huà shì jì 十二烷基*基* 容量： 10克

shēng huà shì jì 十二烷基*基氯化銨 容量： 1克

shēng huà shì jì 十二烷基肌氨酸鈉 容量： 1克

shēng huà shì jì 十二烷基磺酸鈉 容量： 10克

shēng huà shì jì 十二烷基二甲基乙基* 容量： 1克

BW25113 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10shēng huà shì jì 十二烷基苯磺酸鈉 容量： 50克

shēng huà shì jì 十二烷 容量： 1克

shēng huà shì jì 十二醇 容量： 25克

shēng huà shì jì 十八烷基*基* 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 十八烷基*基氯化銨 容量： 10克

shēng huà shì jì 十八冠醚-6 容量： 25克

shēng huà shì jì 十八醇 容量

 BJP 人本周蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 cPLA2 人胞漿型磷脂酶A2 規(guī)格： 48T/96T

 CIg 人胞漿免疫球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

人包蟲(chóng)抗體IgG ELISA Kit，48T/96T 人包蟲(chóng)抗體IgG ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T

 BTA 人膀胱腫瘤抗原 規(guī)格： 48T/96T

 UBC 人膀胱癌抗原 規(guī)格： 48T/96T

 CPN10 人伴侶蛋白10 規(guī)格： 48T/96T

 Cys-C 人半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C 規(guī)格： 48T/96T

 CP 人瘢痕性天皰瘡抗體 規(guī)格： 48T/96T

 PT 人百日咳毒素 規(guī)格： 48T/96T

 LIFR 人白血病抑制因子受體 規(guī)格： 48T/96T

 ALCAM 人白細(xì)胞活化黏附因子 規(guī)格： 48T/96T

 LCA/CD45 人白細(xì)胞共同抗原 規(guī)格： 48T/96T

 CD4 人白細(xì)胞分化抗原4 規(guī)格： 48T/96T

 CD30 人白細(xì)胞分化抗原30 規(guī)格： 48T/96T

 LR 人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素 規(guī)格： 48T/96T

 SLPI 人白細(xì)胞蛋白酶抑制因子 規(guī)格： 48T/96T

 HLE 人白細(xì)胞彈性蛋白酶 規(guī)格： 48T/96T

 C.albicans 人白色念珠菌 規(guī)格： 48T/96T

 LTE4 人白三烯E4 規(guī)格： 48T/96T

 LTD4 人白三烯D4 規(guī)格： 48T/96T

 LTC4 人白三烯C4 規(guī)格： 48T/96T

 LTB4 人白三烯B4 規(guī)格： 48T/96T

： 1克

注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。