MC1061F- 感受態細胞 100ul*10-生命科學儀器 返回列表頁

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培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少15小時。

shēng huà shì jì * 容量： 5克

shēng huà shì jì 碳酸環己胺 容量： 10克

shēng huà shì jì 碳酸胍 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 碳酸鈷 容量： 100克

shēng huà shì jì 碳酸鎘 容量： RT 25毫克

shēng huà shì jì 碳酸酐酶（牛紅血球） 容量： 25克

shēng huà shì jì 碳酸釓 容量： 25克

shēng huà shì jì 碳酸丙二醇酯 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 碳酸鋇 容量： 25克

MC1061F- 感受態細胞 100ul*10shēng huà shì jì 碳酸銨 容量： 100克

shēng huà shì jì 碳化鎢 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 碳化硼 容量： RT，避光 5克

shēng huà shì jì 碳化硅 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 炭疽桿菌診斷抗原 容量： 1米

shēng huà shì jì 炭疽桿菌疫苗 容量： 1米

shēng huà shì jì 炭疽桿菌噬菌體 容量： 1米

shēng huà shì jì 炭疽桿菌沉淀血清 容量： 1米

shēng huà shì jì 鉭片 容量： 避光，-20℃ 5克

shēng huà shì jì 鉭粒 容量： 25克

 VA 大鼠* 規格： 48T/96T

 omentin 大鼠網膜素 規格： 48T/96T

 AGEs 大鼠晚期糖基化終末產物 規格： 48T/96T

 DPD 大鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉 規格： 48T/96T

 DHEA-S 大鼠脫氫表雄酮硫酸酯 規格： 48T/96T

 HABP 大鼠透明質酸結合蛋白 規格： 48T/96T

 HA 大鼠透明質酸 規格： 48T/96T

 FE 大鼠鐵蛋白 規格： 48T/96T

 GP-MM 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 規格： 48T/96T

 GP-II 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II 規格： 48T/96T

 GP-BB 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 規格： 48T/96T

 GSK 大鼠糖原合成酶激酶 規格： 48T/96T

 CDT 大鼠糖缺失性轉鐵蛋白 規格： 48T/96T

 GR 大鼠糖皮質類固醇受體 規格： 48T/96T

 GHbA1c 大鼠糖化血紅蛋白A1c 規格： 48T/96T

 gp130 大鼠糖蛋白130 規格： 48T/96T

shēng huà shì jì 鈦鐵試劑 容量： RT，避光 10克

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態細胞為例。
2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。