Origami（DE3） 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50-生命科學(xué)儀器 返回列表頁(yè)

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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

 TF 人組織因子 規(guī)格： 48T/96T

 t-PA 人組織型纖溶酶原激活劑 規(guī)格： 48T/96T

 LTBP2 人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2 規(guī)格： 48T/96T

 TPS 人組織多肽特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T

 TPA 人組織多肽抗原 規(guī)格： 48T/96T

 HD 人組織蛋白去乙酰化酶 規(guī)格： 48T/96T

 Cath Ab 人組織蛋白酶抗體 規(guī)格： 48T/96T

 cath-K 人組織蛋白酶K 規(guī)格： 48T/96T

 cath-D 人組織蛋白酶D 規(guī)格： 48T/96T

 histon-H2b 人組蛋白H2b 規(guī)格： 48T/96T

 HIS 人組胺 規(guī)格： 48T/96T

 tPSA 人總前列腺特異抗原 規(guī)格： 48T/96T

 CENP-B 人著絲粒蛋白B 規(guī)格： 48T/96T

 TF 人轉(zhuǎn)移因子 規(guī)格： 48T/96T

shēng huà shì jì 葡萄糖酪胨瓊脂 容量： 100克

shēng huà shì jì 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基 容量：

shēng huà shì jì 葡萄糖半固體培養(yǎng)基 容量： RT 5米

shēng huà shì jì 葡萄糖銨培養(yǎng)基 容量： RT 1米

shēng huà shì jì 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測(cè)試盒 容量： RT 1000支/盒

shēng huà shì jì 葡萄球菌增菌肉湯 容量： 2～8℃ 100毫克

shēng huà shì jì 葡萄球菌選擇性瓊脂110號(hào) 容量： 100克

shēng huà shì jì 葡萄球菌選擇性瓊脂 容量： 1克

Origami(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50shēng huà shì jì 葡糖酸內(nèi)酯 容量： 100克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠QAE-A50 容量： 10000U

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠QAE-A25 容量： 保存：-20℃ 2000U

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠LH-60 容量： 250毫克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠LH-20 容量： 50毫克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠G-75 容量： 25毫克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠G-50 容量： 2～8℃ 500毫克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠G-25 容量： 10KU

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠G-200 容量： 250毫克

shēng huà shì jì 葡聚糖凝膠G-150 容量： 2～8℃ 50毫克

注意事項(xiàng):

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。