人白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）試劑盒實驗原理

人白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）試劑盒實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)水平。用純化的人白細(xì)胞B27(HLA-B27)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)，再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞B27(HLA-B27)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)濃度。

操作總程序：

計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

人白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有

析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計

算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行試驗。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

人白細(xì)胞抗原B27（HLA-B27）試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月