人源細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法

目前，血清仍是人源細(xì)胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細(xì)胞死亡，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)，關(guān)鍵的是將所培養(yǎng)細(xì)胞：
1.處于對數(shù)生長中期
2.>90% 活細(xì)胞率
3.適應(yīng)時以較高的起始細(xì)胞接種
以下是細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的使用方法：
*、直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。
第二、連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
（2）當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（3）以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。 （4）當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
（5）每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
在實(shí)驗(yàn)后這些人源細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細(xì)胞能夠*培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。
200mg    Isradipine     75695-93-1     依拉地平標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isoxsuprine Hydrochloride     579-56-6     異舒普林鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isotretinoin     4759-48-2     *標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isopropamide Iodide    71-81-8     異丙碘胺標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isoniazid     54-85-3     雷米封標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isometheptene Mucate     7492-31-1     半乳糖二酸異美汀標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isomalt     64519-82-0     異麥芽酮糖醇標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isoflupredone Acetate    338-98-7     乙酸異氟潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品
200mg    Isocarboxazid     59-63-2     異卡波肼標(biāo)準(zhǔn)品
人源細(xì)胞