腫瘤細胞的培養條件優化

腫瘤細胞和樹鼩原代腎上皮細胞的生長特性，發現樹鼩原代腎上皮細胞和 Ｖｅｒｏ 細胞在１５ ｄ 以內可由對數生*至平臺期，并能在對數期維持一定的生長活力，由此說明樹鼩原代腎上皮細胞能夠充分滿足體外ＥＶ７１ 感染實驗的條件。通過 ＥＶ７１ 對樹鼩原代腎上皮細胞和 Ｖｅｒｏ 細胞感染 ４８ ｈ 后的核酸以及培養上清病毒載量的測定，結果是在感染樹鼩原代腎上皮細胞的培養上清中能明顯檢測到了病毒的擴增條帶，這和陽性對照的 Ｖｅｒｏ細胞結果一致。 并且再測定兩種細胞培養上清中的病毒載量時發現沒有存在顯著性的差異，且都要明顯地高于 ０ ｈ 的洗液，初步確立了 ＥＶ７１ 能夠較好地感染樹鼩原代腎上皮細胞，并且病毒能夠在細胞內進行復制過程。 為了進一步確定 ＥＶ７１ 在被感染細胞內的感染和復制活動，本研究通過 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和免疫熒光分別檢測了細胞內的 ＥＶ７１ 病毒蛋白 ＶＰ１ 和定位情況。 比較樹鼩原代腎上皮細胞和 Ｖｅｒｏ 細胞的結果，其能夠證明和 Ｖｅｒｏ 細胞一樣，在經 ＥＶ７１ 感染２ ｄ后開始，此后在不同時間段均能檢測到 ＶＰ１ 蛋白的持續存在，這和免疫熒光的檢測結果相吻合，說明ＥＶ７１ 在感染樹鼩原代腎上皮細胞后的 ６ ～ ８ ｄ 內病毒可持續存在并活動。

通過本研究，我們成功分離并優化了樹鼩原代腎上皮細胞的培養條件，得到較純且生長狀態良好的原代腎上皮細胞，進而成功建立了 ＥＶ７１ 的樹鼩體外細胞感染模型。 在進行樹鼩的原代腎上皮細胞感染后，通過系統地評價其感染特性，根據被感染細胞中病毒的核酸和蛋白層面檢測結果，均能夠證明 ＥＶ７１ 可以感染樹鼩體外的原代腎上皮細胞，其特征和腫瘤細胞相符。 以上這些研究成果能夠為后繼進一步深入的研究 ＥＶ７１ 的體外感染機制奠定基礎。 同時，ＥＶ７１對樹鼩體外感染模型的建立為將來細胞層面的藥物篩選提供了平臺，進而也為樹鼩活體感染模型的研究提供必要的依據。
HPLC≥98%    trigonelline    胡蘆巴堿    20mg/支
HPLC≥98%    Daphnetin    *（祖師麻甲素）    20mg/支
HPLC≥98%    parthenolide    小白菊內酯    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin A        20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin B    重樓皂甙B    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin C    重樓皂甙C    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin E    重樓皂甙E    20mg/支
HPLC≥98%    Polyphyllin F    重樓皂甙F    20mg/支
HPLC≥98%        烏金甙    20mg/支
HPLC≥98%        獐牙菜甙    20mg/支
腫瘤細胞