免疫細胞幾種目前較為常用和*的固定劑

大多數神經激素、肽類物質為水溶性，在用于免疫細胞化學研究之前，常需固定。但肽類和蛋白質物理、化學性質不同，因而對不同的固定方法或固定劑的反應也不盡相同。某些固定劑甚至可同時破壞和/或保護同一抗原的不同抗原決定簇。因此，在進行免疫細胞化學研究之前，很有必要了解所要研究的物質（蛋白質或肽類）的化學性質，并根據需要來選擇適宜的固定劑（或固定方法）以及改進固定條件。 
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.3） 
試劑：多聚甲醛 40g 
0.1mol/L磷酸緩沖液 至1000ml 
配制方法：稱取40g多聚甲醛，置于三角燒瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸緩沖液（Phosphate Buffer以下簡稱PB），加熱至60℃左右，持續攪拌（或磁力攪拌）使粉末*溶解，通常需滴加少許1n NaOH才能使溶液清亮，zui后補足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混勻。 
該固定劑較適于光鏡免疫細胞化學研究，是動物經灌注固定取材后，繼續浸泡固定2～24h。另外，該固定劑較為溫和，適于組織標本的較*保存。 
2.4%多聚甲醛-*/氫氧化鈉 
試劑：A液：多聚甲醛 40g 
蒸餾水 400ml 
B液：Na2HPO4·2H2O 16.88g 
蒸餾水 300ml 
C液：NaOH 3.86g 
蒸餾水 200m 
配制方法：A液在500ml的三角燒瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛*溶解后冷卻待用。注意，在溶解多聚甲醛時，要盡量避免吸入氣體或濺入眼內。B液和C液配制好后，將B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 將pH調至7.2～7.4，zui后，補充蒸餾水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存備用。 
該固定劑適于光鏡和電鏡免疫細胞化學研究，用于免疫電鏡時，加入少量新鮮配制的戊二醛，使其終濃度為0.5%～1%。該固定劑較溫和，適于組織的*保存。組織標本于該固定液中，4℃冰箱保存數月仍可獲得滿意的染色效果。 
3．Bouin’s液及改良Bouin’s液 
試劑：飽和苦味酸 
40%甲醛 250ml 
冰醋酸 50ml 
配制方法：先將飽苦味酸過濾，加入甲醛（有沉淀者禁用），zui后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中備用。冰醋酸在臨用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 
該固定液為組織學、病理學常用固定劑這一，對組織的穿透力較強，固定較好，結構完整。但因偏酸（pH為3～3.5），對抗原有一定損害，且組織收縮較明顯，故不適于組織標本的*保存。此外，操作時，應避免吸入或與皮膚接觸。 
4．Zamboni’s(Stefanini’s)液 
試劑：多聚甲醛 20g 
飽和苦味酸 150ml 
Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml 
配制方法：稱取多聚甲醛20g，加入飽和苦味酸150ml，加熱至60℃左右，持續攪拌使充分溶解、過濾、冷卻后，加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合（Karasson –Schwlt’s磷酸緩沖液的配制配制方法見后）。 
該固定液適于電鏡免疫細胞化學，對超微結構的保存較純甲醛為優，也適于光鏡免疫細胞化學研究，為實驗室常用固定劑之一。我們在應用中，常采用2.5%的多聚甲醛和30%的飽和苦味酸，以增加其對組織的穿透力和固定效果，保存更多的組織抗原。固定時間為6～18h。 
5．PLP液 PLP液即過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative） 
試劑：過碘酸鈉 
賴氨酸鹽酸鹽（或*）： 
多聚甲醛 
蒸餾水