人源細(xì)胞復(fù)蘇的操作步驟

人源細(xì)胞在實(shí)際操作中，凍存的細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇，復(fù)蘇之后再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇的操作步驟如下：

（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。

（2）迅速放入38℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無(wú)菌下取出細(xì)胞。

（3）在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代。或無(wú)需離心直接將細(xì)胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12～24小時(shí)后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

按照以上步驟復(fù)蘇的凍存人源細(xì)胞存活率高，生長(zhǎng)及形態(tài)良好。
100923    1,2-dibutoxyethane    127-40-2    Diethylmalonylurea                    
100924    乙二醇二丁醚    fludrocortisone    difluoroacetic acid                    
100925    112-48-1    氟氫可的松    difluoromethane                    
100926    1,10-Decanediol    127-31-1    Diheptyl sulfide                    
100927    1,10-癸二醇    2,2-Dichloropropionic acid sodium salt    Dihydrokavain                    
100928    112-47-0    2,2-二氯丙酸鈉    dihydronicotinamide-adenine dinucleotide, disodium salt                    
100929    Undecylenic aldehyde    127-20-8    dihydroterpineol                    
100934    十一碳烯醛    N,N-Dimethylacetamide    Diiodomethane          人源細(xì)胞