兔食管上皮干細(xì)胞培養(yǎng)步驟

干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料：
      1. 大兔的正常食管組織
      2. 6孔培養(yǎng)板：用多聚賴氨酸4℃包被過(guò)夜
      3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L*、200mg/L*和200000U/L*，pH7.4
      4. *、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，*
 
      實(shí)驗(yàn)方法：
      1. 處死大兔，取正常食管組織放入含雙抗的PBS（pH=7.2）中反復(fù)清洗3次，以洗去組織表面的血絲及粘液；
      2. 小心的用眼科剪鑷將食管黏膜與黏膜下組織分離；
      3. 分離出的粘膜組織用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復(fù)沖洗若干次；
      4. 將清洗后食管黏膜*成1mm3 左右大小的組織塊；
      5. 再次用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復(fù)清洗，直至清洗液清亮為止；
      6. 將黏膜組織塊按1塊/cm2 的密度接種于6孔培養(yǎng)板中，上皮面朝下；
      7. 將貼滿組織塊的培養(yǎng)板室溫放置5~10分鐘，待組織塊貼壁后，轉(zhuǎn)入37℃、5%CO2 的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
      8. 靜置2h左右，待組織塊基本不會(huì)浮起后，加入0.5-1ml培養(yǎng)液，置于37℃、5%CO2 的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。3-4天后有上皮干細(xì)胞從組織邊緣爬出，7天左右鋪滿板面。
人轉(zhuǎn)*酶2C多肽(TGM2)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    human tranGSlutaminase 2C polypeptide，TGM2 ELISA Kit                                        
人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide，PⅠNP ELISA Kit                                        
人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Cross-linked Carboxy-terminal opeptide of type Ⅰ collagen，ⅠCTP ELISA Kit                                        
人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human C-opeptide of type Ⅰ collagen，CTX-Ⅰ ELISA Kit                                        
人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human hepatic lipase，HL ELISA Kit                                        
人乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒    進(jìn)口/分裝    Human Heparanase，HPA ELISA Kit                                        
人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試劑盒     進(jìn)口/分裝    Human type Ⅱ collagen helical peptide，HELIX-ⅡELISA Kit  
干細(xì)胞