人源細胞培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的問題及解決方式

在人源細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。
一、培養(yǎng)細胞不貼壁
可能原因： 
●*消化過度 
●支原體污染 
●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）               
●細胞老化 
●接種細胞起始濃度太低或太高 
解決方法： 
●縮短*消化時間或降低*濃度 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 
●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 
●啟用新的保種細胞 
二、懸浮細胞成簇
可能原因： 
●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子； 
●支原體污染； 
●蛋白酶過度消化使得細胞裂解； 
●DNA污染 
解決方法： 
●用無鈣鎂*洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液； 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體； 
●用DNaseI處理細胞
三、培養(yǎng)細胞生長緩慢
可能原因：
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 
●培養(yǎng)液中一些人源細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 
●培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染； 
●試劑保存不當(dāng)； 
●接種細胞起始濃度太低； 
●細胞已老化； 
●支原體污染 
解決方法： 
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 
●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加*及生長因子；
●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；
●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；
●增加接種人源細胞起始濃度； 
●換用新的保種細胞； 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。