人源細(xì)胞爬片的免疫熒光步驟

1.取出人源細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。

注意：有的時候作的細(xì)胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比較方便，避免了來回夾取，另外洗的時候加PBS不要太沖，不要細(xì)胞沖下來。洗的時候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，沒有等5分鐘或10分鐘。

2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。

3. 0.2%Triton X-100通透10分鐘，PBS洗三遍。

4. 人源細(xì)胞與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。

5. 一抗4度濕盒內(nèi)過夜，也可37度2小時，感覺前者效果好，PBS洗三遍。

6.二抗室溫2小時(避光)，或者37度1半小時，PBS洗三遍。

7.用DAPI染核，然后直接照熒光片。

8.蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因為甘油不象樹脂那樣會干，所以不用指甲油封的話會弄的一塌糊涂。

建議：1.人源細(xì)胞還是染完之后沒有封片前直接照一些，因為有的時候可能封片會出現(xiàn)問題，再想照反而沒有了，另外不要拖太長時間，熒光會崔滅的。2.熒光的片子一定要避光保存，保存的好的話，過一段時間仍然能照出很好的片子。3.二抗用之前一定離心，不然有的時候有那種沉淀，在片子上就是一個很大的非特異性熒光光點，非常難看。