在免疫酶技術中，首先要斷定的變異要素就是酶符號物的作業濃度。因為酶符號物濃度的很小改變，便可導致實驗成果發生很大的波動。別的，因為濃度過高，可使非特異性反響添加，而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此，正式實驗前有必要滴定其作業濃度。
(一)酶符號抗體的滴定辦法：將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上，然后將經過一系列稀釋的酶標抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反響，以酶與底物的顯色反響程度來斷定酶符號抗體的效價，或稱作業濃度。
(二)過程：先將抗原(或抗體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右，于聚苯乙烯板孔內加0.1ml，4℃過夜，次日以洗刷緩沖液洗刷3次。酶符號抗體用1%BSA-PBS液順次稀釋成1:100，1:200，1:400，1:800，1:1600(依據據抗體的滴度而定)，分別參加反響孔中，每個稀釋度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小時后洗刷。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分鐘。以2M H２SO4 0.05ml終止反響。
(三)成果斷定：主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值，并以OD為縱座標，結合物濃度為橫座標，制作滴定曲線。由曲線上查得OD值為1.0左右，且曲線斜率zui大時的酶標抗體稀釋度，即為該符號物的作業濃度。
注意事項
1. 在具有高質量HRP的條件下，所要符號的抗體也要活性高、效價高(zui低1:16)、純度高、親和力好，這是保證符號物效價高，免疫活性好的首要條件。
2. 所運用試劑的PH和濃度及用量有必要嚴厲把握。所用試劑，(或必需)新鮮制造。如在戊二醛符號法中所用戊二醛應為新鮮純品，因戊二醛貯存過久可構成縮和體(雜質)。不然，影響符號作用。
3. 室溫攪拌時須避光，室內溫度一般在25℃為宜。符號物每次透析前，須認真查看，避免漏液。
4. 濃的符號物相當安穩，常參加30-40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1-2年，但稀釋成1:10，只能保存數周。已制造的運用液應在12小時內用完。切忌反復凍融。
