1.ELISA試劑盒包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。（一起做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調查成果：反響孔內色彩越深，陽性程度越強，陰性反響為無色或極淺，根據所呈色彩的深淺，以“+"、“-"號表明。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
ELISA試劑盒間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗刷3次；
3.加必定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷；
4.（一起做空白、陰性及陽性孔對照）于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗刷；
6.ELISA試劑盒zui終一遍用DDW洗刷。
其余過程同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
