干細胞轉染液的配制

干細胞轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。那么具體的實驗方法是什么呢？小編百思不得其解！費了好大勁去請教了技術老師，好東西大家要一起分享，于是今天小編決定把細胞轉染技術以HeLa細胞為例整理出來，分享給大家。

HeLa細胞傳代入24孔板3個孔，1ml10％FBS胎牛血清的DMEM培養(yǎng)，密度以使其第2天能生長至70％左右面積為宜。

1.轉染液的配制：

A液：2×1µl lipofectamine Gibco 滴入 2×50µl無血清培基中，混勻后靜置。

B液：9.36µl MMP14-siRNA (4рmol/μl) 和9.36µlβ－gal-siRNA (4рmol/μl)分別與50µl無血清培基混勻后靜置。

2、待A液靜置5分鐘時，取50µlA液分別滴入B液的兩組中?；靹颍o置15分鐘時，開始準備細胞。

3、棄掉原細胞培養(yǎng)液，用2ml 1×PBS加入培養(yǎng)皿中，前后左右傾斜培養(yǎng)皿，洗細胞一次，盡量吸凈PBS。轉染混合液中分別補100µl無血清培養(yǎng)基混勻，馬上滴入洗好的細胞上。靜置約2分鐘，放入37℃孵箱中。另設細胞陰性對照組，只用無血清培基處理。

4、轉染后4小時，補800ml 15％FBS的DMEM，放入37℃孵箱中。

6.轉染后70小時準備侵襲實驗。步驟見*部分，不同之處在于Matrigel為1mg/ml 30µl。

7.干細胞侵襲實驗觀察12小時后，取出染色。
鑒別    泛影酸    100021-198102    對照品        200mg
HPLC法含量測定    格隆溴銨（曾用名：甘羅溴銨）    100022-200403    對照品        100mg
鑒別    谷氨酸    100023-198601    對照品        50mg
檢查    磺胺    100024-198702    對照品        50mg
含量測定    磺胺甲噁唑     100025-199503    對照品        50mg
HPLC法含量測定    磺胺嘧啶    100026-200402    對照品        100mg
含量測定    炔諾孕酮    100028-199907    對照品        100mg
含量測定    甲萘醌    100029-200009    對照品        50mg
檢查    甲巰咪唑    0030-200504    對照品        100mg
HPLC法含量測定用    甲氧芐啶    100031-200304    對照品        100mg
含量測定    己酸羥孕酮    100032-198501    對照品        50mg
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