確定毒性水平和消除細(xì)胞株培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟

①細(xì)胞株在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
        ②分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
        ③每天觀(guān)測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
        ④確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
        ⑤在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
        ⑥重復(fù)步驟4。
        ⑦在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代，確定污染是否以已被消除。
3.支原體(mycoplasma) 污染的細(xì)胞， 是否能以肉眼觀(guān)察出異狀？
       不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專(zhuān)家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀(guān)分辨之。可通過(guò)支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
        支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)，細(xì)胞株代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
250    用于飲用水中異生細(xì)菌分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)    R2A Agar    R2A 瓊脂
250    用于飲用水，水源水中總大腸菌群的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))    Lactose Peptone Broth    乳糖蛋白胨培養(yǎng)液    
250    用于飲料中真菌及酵母菌檢測(cè)(Acumedia方法)    m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH    改良綠色酵母菌和真菌肉湯
250    用于飲料中耐酸細(xì)菌的分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)    ORANGE SERUM AGAR    桔汁瓊脂
10ml*2    用于吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)配套試劑        Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒   
100    用于抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)    No. 3 Bile Salt     三號(hào)膽鹽
250    用于一次性使用衛(wèi)生用品中溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)    Pick’s Broth Base B    匹克氏肉湯基礎(chǔ)B    
細(xì)胞株