原代細(xì)胞培養(yǎng)生存期的三個階段

1. 原代細(xì)胞潛伏期（latent phase） ：

接種 經(jīng)過 懸浮期（細(xì)胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形） 貼壁。

初代培養(yǎng)細(xì)胞 經(jīng)過 10～24小時或更多時間。

連續(xù)細(xì)胞系和癌細(xì)胞系 經(jīng)過 10～30分鐘 貼附。

貼附現(xiàn)象是一個非常復(fù)雜和受多種因素的影響。

影響細(xì)胞貼附：底物表面不干凈，影響細(xì)胞貼附。

利于細(xì)胞貼附：底物表面帶有陽性物質(zhì)與特殊物質(zhì):

纖粘連蛋白（fibronectin FN）、

細(xì)胞表面蛋白（cell surface proteinCSP）
這些物質(zhì)有的存在與細(xì)胞表面,有的來自血清。

潛伏期特點：

長短與細(xì)胞接種密度、種類、使用的培養(yǎng)基性質(zhì)有關(guān)。

（1）細(xì)胞貼附后進入潛伏期,細(xì)胞無增殖。少見分裂相，細(xì)胞有運動活動。

（2）初代培養(yǎng) 細(xì)胞潛伏期約為24～96小時或更長，

連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期約6～24小時。

（3）細(xì)胞接種密度大潛伏期短。

（4）細(xì)胞出現(xiàn)分裂相增多時，標(biāo)志細(xì)胞進入指數(shù)增生期。

2．指數(shù)增生期（logarithmic growth phase）：

特點：細(xì)胞增殖Z旺盛階段,分裂相增多。

細(xì)胞分裂指數(shù)（mitotie index MI） ：

表示每1000個細(xì)胞中的分裂相數(shù)。

條件：分裂相數(shù)與細(xì)胞種類、培養(yǎng)成分、pH培養(yǎng)箱溫度有關(guān)。

細(xì)胞分裂指數(shù)：

初代細(xì)胞：在0.1％～0.5％之間％ ,

連續(xù)分裂細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞：3 ～5％ 

指數(shù)增生期是作為細(xì)胞一代活力的時期,是進行實驗和Z主要的階段。 

指數(shù)增生期持續(xù)3～5天，細(xì)胞數(shù)量增多后生長空間變小，細(xì)胞相互接觸可連接成片。 

正常細(xì)胞：細(xì)胞相互接觸能抑制細(xì)胞運動，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制（contact inhibition）。 

腫瘤細(xì)胞：沒有這種現(xiàn)象，可作為區(qū)別正常與腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。當(dāng)腫瘤細(xì)胞達(dá)到一定密度后向三維空間發(fā)展，使細(xì)胞發(fā)生堆積（piled up）。 

由于細(xì)胞不斷增殖分裂，細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增多，培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多，細(xì)胞受營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（Density inhibition）,導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。 

3.停滯期（stagnate phase） 

細(xì)胞量和密度達(dá)到飽和，細(xì)胞停滯增殖。表明細(xì)胞進入到停滯期,細(xì)胞數(shù)量持平，也稱為平頂期（plateau）。 

特點：原代細(xì)胞不增殖,有代謝活動。培養(yǎng)液中的營養(yǎng)已逐漸耗盡,代謝產(chǎn)物積累增多,pH降低，此時需要傳代,否則細(xì)胞將會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,細(xì)胞會從底物脫落死亡。 

注意： 

傳代過晚將影響下一代細(xì)胞的生長,至少要再傳 1～2代 ,通過換液淘汰死細(xì)胞和受損較輕的細(xì)胞。待細(xì)胞全部恢復(fù)后再用。
*        100克    氣單胞菌鑒別瓊脂
*        100克    血瓊脂基礎(chǔ)2號
*        1公斤    液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基
*        100克    卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)
*    RT    25克    胰膘肉湯基礎(chǔ)
*        25公斤    0.5%純度葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
*        40克    固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
*        500毫升    聚山梨酯80培養(yǎng)基（真菌）
*    RT    100克    改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基
原代細(xì)胞