NRAMP-2試劑盒標(biāo)本激活方法及檢測(cè)程序

NRAMP-2試劑盒標(biāo)本激活方法:

1. 將450ul 標(biāo)本稀釋液加入到一支 1.5ml 進(jìn)口聚丙烯管中 , 再加 10ul 血清或血漿標(biāo)本。

2. 加20ul 1 N HC I ,蓋緊，上下混勻。 2 － 8 ℃ 放置60± 2 分鐘。

3. 加20ul 1 N NaOH, 蓋緊，上下混勻。

4. 即用，或放-20/-70 ℃ 保存3 天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘 以稀釋倍數(shù) 50 。 （ 注意：不同的標(biāo)本E2F1 的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度）

5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿 10 倍稀釋 (410ul 的標(biāo)本稀釋液＋ 50ul 樣本＋ 20ul 的 1N HCI+20ul 的 1N NaOH) 。

檢測(cè)程序:

1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品（已激活） 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔中加入第一抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8. 每孔加入100ul 終止液混勻。