干細胞鋪板的實驗技巧分享

     做干細胞生物學實驗，細胞鋪板大概是我們常見的一個實驗。但有時候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。下面為大家分享幾點經驗。

      盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時間。

    96孔板一般以100 微升每孔接種，直接用100 微升移液器吸取細胞懸液，沿孔壁（稍離開一點孔底即可，不要離底太高）直接接入，移液器不需*打到大，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次敲擊剩余三個邊，靜置約5分鐘，放入37度培養箱。

      6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個孔加入少量無血清培養基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板好掌握，效果沒有96孔板好。

培養瓶里面加好干細胞以后(比如傳代好/分好細胞以后)，先順時針搖晃3次，馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養箱后,平放著培養瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。

 phospho-CDKN1A/P21 (Thr145) 肌球蛋白輕鏈9抗體

 phospho-CDKN1A/P21 (Thr57) 肌球蛋白輕鏈3抗體

 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser10) 肌球蛋白輕鏈1/3抗體

 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178) 肌球蛋白磷酸酶抗體

 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr157) 肌紅蛋白抗體(肌細胞生成素)

 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr187) 肌紅蛋白抗體

 phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr198) 肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體

 phospho-CDKN2A/P16 (Ser140) 肌動蛋白α(α-SMA)抗體

 phospho-CDKN2A/P16 (Ser152) 活性依賴的神經保護肽抗體

 phospho-CDKN2A/P16 (Ser8) 活性氧簇ROS抗體
干細胞