活細(xì)胞直接觀察方法

(一)細(xì)胞系相差觀察和攝影

1．相差裝置的使用 相差裝置或顯微鏡都是由兩部分組成，相差聚光器和相差接物鏡。在每個(gè)相差接物鏡的光學(xué)系統(tǒng)中都有一個(gè)光環(huán)透鏡；在聚光器內(nèi)有數(shù)個(gè)可轉(zhuǎn)換的相位板，一定倍數(shù)的接物鏡使用時(shí)需與相應(yīng)的相位板一致。相差觀察時(shí)對照明要求嚴(yán)格，光軸要對正，視野照明光度需均勻。

2．操作步驟

(1)調(diào)好相位板，使聚光器相位板號(hào)與接物鏡放大倍數(shù)(相位板)相一致。

(2)抽取接目鏡，再更換輔助望遠(yuǎn)鏡，移動(dòng)輔助鏡筒并調(diào)整聚光器相位板，使視野中兩個(gè)大小一樣的光環(huán)必須相互吻合。

(3)細(xì)胞系再重新?lián)Q上原接目鏡，即成相差圖像；當(dāng)更換不同倍數(shù)接物鏡時(shí)，需按上述過程重新調(diào)節(jié)。

3．注意事項(xiàng)

(1)對培養(yǎng)瓶、皿要求：相差顯微鏡觀察要求底物平坦、質(zhì)地均勻、透光度強(qiáng)；一般玻璃器皿凹凸不平，不適合做相差觀察和攝影，用質(zhì)地均勻的塑料器皿培養(yǎng)較好。

(2)準(zhǔn)備：觀察和攝影前，要擦凈培養(yǎng)瓶表面，切勿殘留污跡而影響透光度。

(3)調(diào)光：調(diào)整照明光的照明度及光軸，使視野照明均勻。對準(zhǔn)光軸是顯微攝影的重要條件，否則不易獲得理想效果。

(4)細(xì)胞系在無自控?cái)z像裝置初次拍攝時(shí)，應(yīng)將放大倍數(shù)、照明強(qiáng)度和曝光等條件逐一記錄，再做一組不同曝光時(shí)間的試驗(yàn)，顯影后選取組合，作為以后再拍攝時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)。