原代細胞污染處理流程

原代細胞污染處理流程
1、將污染的培養液倒掉，轉燒瓶口，加入10 mlPBS，適當晃動清洗培養瓶，然后倒掉。轉燒瓶口。

2、繼續加入10mlPBS，同樣方法晃動，清洗培養瓶，然后倒掉。

3、繼續加入5mlPBS，同樣方法洗瓶，主要是培養面，然后倒掉。

4、重復步驟3再洗。

5、重復步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

7、原代細胞加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。

9、加入10ml培養液，加入2ml雙抗，放置培養箱培養，5小時之后，倒掉培養基，加入PBS洗瓶兩次，然后加入胰酶消化，吹打后置于離心機800-1000r/min離心，然后洗一次。置于新的培養瓶里培養，培養體系加入2ml雙抗。

10、24h之后，視情況換液，若仍然污染嚴重，培養基渾濁，重復以上步驟，若看不到污染物，則繼續步驟1)、3）、4）、6）、8），然后加入培養液培養，培養體系加入2ml雙抗。

11、24h之后，若仍污染嚴重，可再重復一次，若還污染只能棄之（不過一般沒有出現這種情況），若鏡下不見污染物，則換液PBS洗瓶，原代細胞正常培養。