ATCC細胞培養方法分析

1.ATCC細胞玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;
2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養板照射3小時以上;
3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養基內,用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;
4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,ATCC細胞分裝成支置-20度保存;
5.培養箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應照射1小時以上,如有高溫滅菌的應按程序來菌).至少每月一次.
6.進入操作時應注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時注意無菌臺內空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來往,如果數量較多,培養瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應相隔一定的距離,開瓶(蓋)時應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒,開開后應用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.ATCC細胞整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點.