原代細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)分析

原代細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)分析

原代培養(yǎng)(Primary Culture)也稱初代培養(yǎng)，是指從體內(nèi)或組織中取出的細(xì)胞直接進(jìn)行培養(yǎng)，到*次傳代的階段，此階段一般可持續(xù)1-4周。原代培養(yǎng)所獲得的細(xì)胞培養(yǎng)物即為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞可通過組織塊培養(yǎng)直接長出單層細(xì)胞，也可用酶或機(jī)械方法將組織分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得。在傳代前的培養(yǎng)均可認(rèn)為是原代培養(yǎng),原代細(xì)胞一旦進(jìn)行傳代培養(yǎng)(Subculture),便改稱為細(xì)胞系(Cell Line),而不再稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)Z大的優(yōu)點(diǎn)是，組織和細(xì)胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大變化，在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。特別是在細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)合時(shí)，原代培養(yǎng)的細(xì)胞其某些特殊功能表達(dá)尤為強(qiáng)烈，在這個(gè)培養(yǎng)階段能更好地顯示其與供體組織密切相關(guān)的形態(tài)學(xué)特征。在供體來源充分、條件穩(wěn)定的情況下，采用原代培養(yǎng)做各種實(shí)驗(yàn)，如藥物測(cè)試、細(xì)胞的分化發(fā)育和功能等效果會(huì)更好。但應(yīng)注意，原代培養(yǎng)的細(xì)胞是異質(zhì)的。由于原代細(xì)胞來源于多種細(xì)胞組成的組織，成分比較復(fù)雜，即使全為同一類型的細(xì)胞，如上皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞，仍具有異質(zhì)性。此外，原代細(xì)胞的相互依存性強(qiáng)，而獨(dú)立生存能力差，因而細(xì)胞克隆形成率很低。因此，在分析細(xì)胞的生物學(xué)特性時(shí)會(huì)比較困難。其次，由于供體的個(gè)體差異以及其他一些原因，細(xì)胞群的生長效果有時(shí)也不一致。

原代細(xì)胞也是建立各種細(xì)胞系(株)必經(jīng)的階段。假如原代培養(yǎng)能夠維持幾小時(shí)甚至更長，即可進(jìn)行進(jìn)一步篩選。有的細(xì)胞具有繼續(xù)增殖能力，有的細(xì)胞類型只是存活而不會(huì)增殖；另有一些細(xì)胞只在特殊條件下被應(yīng)用，此外細(xì)胞的類型與分布也會(huì)發(fā)生改變。在單層培養(yǎng)的情況下，細(xì)胞匯合以后，瓶底全部鋪滿，對(duì)密度有依賴性的細(xì)胞則由于接觸抑制，生長逐漸減緩或停滯，而失去密度依賴性的細(xì)胞還會(huì)繼續(xù)生長，天然或自發(fā)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞則過度生長。借助于頻繁傳代，保持細(xì)胞低密度生長，有利于保存細(xì)胞的正常表型(如小鼠成纖維細(xì)胞)。而自發(fā)轉(zhuǎn)化則傾向于高密度的細(xì)胞過度生長。