恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒品牌 返回列表頁

組成及試劑配制:
1、恩杜姆病毒PCR檢測試劑盒品牌酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。

MECP2 ELISA Kit谷氨酸受體紅藻氨酸離子1抗體甲基CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)ELISA試劑盒
MEFV ELISA Kit一般受體磷酸肌醇相關(guān)支架蛋白1抗體家族性地中海熱基因(MEFV)ELISA試劑盒
MP1 ELISA Kit谷氨酸受體紅藻氨酸離子5抗體加溶金屬蛋白酶1(MP1)ELISA試劑盒
DCP2 ELISA Kit棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶GODZ抗體加帽酶2(DCP2)ELISA試劑盒
SPON2 ELISA KitG蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白1抗體脊椎蛋白2(SPON2)ELISA試劑盒
SPON1 ELISA KitG氨基丁酸受體β2+3/GABAA Rβ2+GABAA Rβ2抗體脊椎蛋白1(SPON1)ELISA試劑盒
KY ELISA KitG蛋白α抗體脊柱后側(cè)凸肽酶(KY)ELISA試劑盒
KHK ELISA KitG蛋白β樣蛋白抗體己酮糖激酶(KHK)ELISA試劑盒
HK2 ELISA Kit通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體己糖激酶2(HK2)ELISA試劑盒
HK1 ELISA Kit磷酸化gp130抗體己糖激酶1(HK1)ELISA試劑盒
CHI3L2 ELISA Kit糖脂轉(zhuǎn)移蛋白結(jié)構(gòu)域2抗體幾丁質(zhì)酶3樣蛋白2(CHI3L2)ELISA試劑盒
CHIT1 ELISA Kit高爾基體膜相關(guān)蛋白6樣蛋白4抗體幾丁質(zhì)酶1(CHIT1)ELISA試劑盒
CSF2Rβ ELISA Kit胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體集落刺激因子2受體β(CSF2Rβ)ELISA試劑盒
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Q2 ELISA Kit促代謝型谷氨酸受體2抗體集鈣蛋白2(Q2)ELISA試劑盒
Q ELISA KitG蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體集鈣蛋白(Q)ELISA試劑盒
EML2 ELISA Kitβ1-6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶6抗體棘皮動物微管關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(EML2)ELISA試劑盒
KNG1 ELISA Kit牛磺酸/β-氨基乙磺酸抗體激肽原1(KNG1)ELISA試劑盒
PK ELISA Kit赤霉素抗體激肽釋放酶原(PK)ELISA試劑盒
KAL ELISA Kit鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白X抗體激肽釋放酶結(jié)合蛋白(KAL)ELISA試劑盒
KLK9 ELISA KitGRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體激肽釋放酶9(KLK9)ELISA試劑盒
KLK8 ELISA Kitγ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶輕鏈2抗體激肽釋放酶8(KLK8)ELISA試劑盒
KLK7 ELISA Kit原鈣粘蛋白γA1抗體激肽釋放酶7(KLK7)ELISA試劑盒
KLK6 ELISA KitG蛋白偶聯(lián)受體70抗體激肽釋放酶6(KLK6)ELISA試劑盒
KLK5 ELISA KitG蛋白偶聯(lián)受體71抗體激肽釋放酶5(KLK5)ELISA試劑盒
KLK4 ELISA Kit谷氨酸受體δ2/GluR-δ2抗體激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒
KLK3 ELISA Kit血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體激肽釋放酶3(KLK3)ELISA試劑盒
KLK2 ELISA Kit谷氨酸脫羧酶67抗體激肽釋放酶2(KLK2)ELISA試劑盒
KLK15 ELISA Kit生長抑制DNA損傷基因45抗體激肽釋放酶15(KLK15)ELISA試劑盒
KLK14 ELISA Kit胃泌素抑制肽抗體激肽釋放酶14(KLK14)ELISA試劑盒
KLK13 ELISA Kit葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體激肽釋放酶13(KLK13)ELISA試劑盒

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。