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    小鼠羊膜上皮細(xì)胞

    參  考  價(jià)面議
    具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

    產(chǎn)品型號(hào)

    品       牌其他品牌

    廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

    所  在  地上海市

    更新時(shí)間:2022-05-19 16:38:21瀏覽次數(shù):228次

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    原代細(xì)胞
    細(xì)胞培養(yǎng)
    貨號(hào) GOY-01X1338
    小鼠羊膜上皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:迷迭香精油 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
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    58-93-5氫噻嗪 規(guī)格: 100mg
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    公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

    產(chǎn)品名稱

    小鼠羊膜上皮細(xì)胞

    規(guī)格

    5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

    分類

    原代細(xì)胞

    貨號(hào)

    GOY-01X1338

    商品介紹:

    名稱 小鼠羊膜上皮細(xì)胞

    2.組織來(lái)源:胎盤組織

    3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

    4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

    小鼠羊膜上皮細(xì)胞分離自胎盤組織;胎盤(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官,由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng),而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的最內(nèi)層,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細(xì)胞,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),其光滑,無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性;在電鏡下,其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能。

    5.方法簡(jiǎn)介:

    ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜上皮細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

    6.質(zhì)量檢測(cè):

    ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

    7.培養(yǎng)信息:

    包被條件鼠尾膠原2-5μg/cm2

    培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、PenicillinStreptomycin

    產(chǎn)品貨號(hào)CM-M227

    換液頻率每2-3天換液一次

    生長(zhǎng)特性貼壁

    細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

    傳代特性可傳1-2

    消化液0.25%

    培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%CO25%

    使用方法:

    收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

    1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

    2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    3. 細(xì)胞傳代

    1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

    2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;

    3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

    4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

     

    培養(yǎng)操作:

    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

    3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

    4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;

    1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    圖片13.jpg

    細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

    1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

    2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

    二.細(xì)胞處理:

    1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

    2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

    方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

    100mL 濕潤(rùn)劑 P-40 Nonidet P-40(NP-40) 室溫保存

    50T 病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    50 μl Lyso-Tracker Red(溶體紅色熒光探針) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

    100mL CAPS Buffer,0.5M,pH10.5  CAPS Buffer,0.5M,pH10.5  常溫保存

    50次 柱式miRNA PAGE膠回收試劑盒 Column miRNABACK 4℃保存

    2 ug PinPoin

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