大鼠精原干細胞 返回列表頁

實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    大鼠精原干細胞

2.組織來源：睪丸組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

大鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的一群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的一些*優勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節機制的深入研究，精子發生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養。在哺乳動睪丸內，精子發生時一個受高度調控和持續的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數量，另一方面又不斷執行分化成各級生精細胞直至最后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發生的最原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養體系的建立，在生物學、醫學、畜牧業生產及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠精原干細胞采用先機械吹打、后消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的大鼠精原干細胞經CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-R171

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性懸浮

細胞形態球形

傳代特性可傳3代左右

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

1次 一步法96孔板質粒DNAout（真空法）  

2 ug pET-44a(+) pET-44a(+) 低溫運輸，-20℃保存

鈉氏試劑  5ML*2

1瓶 A7d細胞株 A7d 低溫運輸和保存

營養瓊脂（NA）顆粒 Nutrient Agar 250g

50次 甲基化專一性PCR試劑盒 Methylation Specific PCR Kit 常溫保存（PCR MagicMix 2.0需要-20℃保存）

100mL MOPS Buffer,0.5M,pH9.0   MOPS Buffer,0.5M,p?嵌?L?

大鼠精原干細胞HIFPH4  缺氧誘導因子脯氨酰4羥化抗體 規格: 0.2ml

強化梭菌鑒別瓊脂（DRCA） Differentia Reinforced Clostridial Agar 250g

ENC1/KLHL35  外胚層神經皮層蛋白1抗體 規格: 0.2ml

1個 15mLDNA超濾離心管(150-250KD)  

SORBS2/ArgBP2  氨酸結合蛋白2抗體 規格: 0.2mlPhospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244)  磷酸化S6核糖體蛋白抗體 規格: 0.1ml

1g 亞精胺 ( 精脒 )  4℃保存

S100A10  S100鈣結合蛋白A10抗體 規格: 0.2ml

Shiga-like toxin IIe variant subunit A  大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體（O139菌型）抗體 規格: 0.2ml

TASK 3/KCNK9  酸敏性鉀離子通道蛋白抗體 0.2ml

1mg 堿性 ( 牛小腸 ) Phosphatase Alkaline（Calf Intestine） -20℃保存

500mL Blotto in PBS  Blotto in PBS  常溫保存

100mL 核酸印跡膜染液 Nucleic Acid Membrane Stain 常溫