TSZelisa試劑盒的經驗總結

TSZelisa試劑盒檢測系統可謂是免疫學反應應用到科研生產中為廣泛為靈敏的技術手段。可是在新老手操作過程中總是會出現或大或小的問題，本人在剛開始做ELISA時就面臨很多困難，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低,自己也為此苦惱過很長一段時間，隨著自己技術水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。下面就由我拋磚引玉地來說一下，做ELISA的經驗總結:

 1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。②脂類物質:可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱guo ye或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。

 2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，TSZelisa試劑盒這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

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