免疫沉淀過程中需要注意的幾個關鍵影響因素

1、進口原裝elisa試劑盒樣品處理的質量

   免疫沉淀實驗成功的關鍵在于*步樣品處理。免疫沉淀實驗本質是處于天然構象狀態的抗原和抗體之間的反應，而樣品處理的質量決定了抗原抗體反應中抗原的質量，如抗原的豐度及抗原的構象狀態。
   樣品處理應根據抗原樣品的來源如組織樣品、細胞或其他形式的樣品，選擇適當的方式進行細胞或組織破碎，使待檢抗原釋放至樣品溶液中。裂解緩沖液的使用應注意添加合適的蛋白酶抑制，避免抗原或抗原-其他分子復合物被降解，另外，應選用去垢劑強度合適的裂解液，既保證有效裂解細胞釋放抗原又不破壞蛋白質之間的相互作用。

2、抗體的選擇
   在考慮抗體特異性的同時，還需考慮抗體對抗原的親和力，如單克隆抗體只對抗原的單一表位具有良好的特異性，因此在免疫沉淀中如果抗原表位暴露不充分，受到破壞，或受其他因素影響，造成抗體不能識別抗原，無法有效形成免疫沉淀復合物，那么這將直接影響免疫沉淀的結果。而多克隆抗體或混合單克隆抗體可以和抗原的多個表位結合，從而解決親和力的問題。但是，并不是所有抗體都能用于免疫沉淀，進口原裝elisa試劑盒應選用經IP實驗驗證后的抗體以確保實驗結果的可靠性。此外，不同類型、同類不同亞型的抗體對蛋白 A或G的親和力不同，應選擇合適的抗體及微球用于免疫沉淀。

3、微球的選擇
   目前廣泛應用于免疫沉淀的微球以結合了蛋白 A或G的瓊脂糖和磁性微球為主。瓊脂糖材料是無色透明、粒徑達微米級的具有多孔表面的微球，有巨大的表面積，蛋白結合量高，曾一度成為免疫沉淀技術中的主要材料。但在免疫沉淀操作中需要采用離心的方法達到固液分離，而反復離心產生的物理應力極易破壞蛋白的天然構象及完整性，且由于瓊脂糖本身容易破碎，不易保存，限制了瓊脂糖微球在免疫沉淀中的發展。相比之下，磁性微球其核心為超順磁性粒子，核心外層包裹一層高分子材料，表面平滑，粒徑可達納米級，比表面積大，單位重量的微球蛋白結合量更大。超順磁性微球可以在外加磁場中表現磁性，實現快速有效分離，大大縮短實驗操作時間。溫和的磁性分離方式避免反復離心對蛋白天然構象及完整性的破壞。超順磁性微球在增大機械強度和穩定性的同時，縮減了產品造價。上述的優勢使超順磁性微球成為免疫沉淀試劑盒行業的新秀，進口原裝elisa試劑盒逐漸被研究者所采用。