猴補(bǔ)體（C4）elisa試劑盒說明書

猴補(bǔ)體（C4）elisa試劑盒說明書

操作步驟 
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。 
480µg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
240µg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
120µg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
60µg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
30µg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。 
8. 洗滌：操作同5。 
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘. 
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。