Y190 感受態細胞操作方法

Y190 感受態細胞操作方法：  

1.Y190 感受態細胞100ul*50規格取100μl冰上融化的DH5α感受態細胞，加入目的DNA（質粒或連接產物）并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。  隨后，為了確保DNA能夠有效進入感受態細胞，我們需要執行一個關鍵的熱激步驟。將含有DNA的感受態細胞混合物迅速轉移到預先加熱至42°C的水浴中，精確計時90秒。這一短暫的高溫處理能夠暫時性地改變細胞膜的通透性，允許外源DNA通過。完成熱激后，立即將試管重新放回冰上，靜置2-3分鐘，使細胞膜恢復其原有的穩定性，防止DNA的泄漏。

接下來，為了復蘇細胞并表達抗性基因（如果質粒攜帶的話），需要向管中加入800μl無抗生素的LB培養基，并置于37°C搖床中，以200-250rpm的速度溫和振蕩培養45分鐘至1小時。此過程中，細胞開始分裂并表達任何可能已轉入的質粒上的基因，包括可能賦予抗生素抗性的基因。

培養結束后，根據實驗需求，我們可以將細胞懸液進行適當稀釋，然后取一定體積（如100μl）涂布到含有相應抗生素的LB瓊脂平板上。使用無菌的玻璃涂布器輕輕均勻地涂抹，確保細胞均勻分布。之后，將平板倒置放在37°C恒溫培養箱中培養過夜，通常為12至16小時。

次日，觀察平板上菌落的形成情況。如果轉化成功，我們將看到清晰可見的、大小均一的菌落生長，這些菌落即為成功導入了目的DNA的DH5α細胞克隆。至此，感受態細胞的轉化實驗便告一段落，接下來的步驟將根據實驗目的進行質粒提取、酶切驗證或進一步的分子生物學分析。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。  

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。  

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應  

抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.Y190 感受態細胞100ul*50規格感受態細胞在冰上融化。  

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。  

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。